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Benzonase核酸酶

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C2001 Benzonase核酸酶
(科研级)
25KU 200 Benzonase核酸酶说明书
100KU 650
10000KU(工业级) 40,000
C2002 无内毒素Benzonase核酸酶 25KU 500 无内毒素Benzonase核酸酶说明书
100KU 1500
5000KU(工业级) 45,000
C2003 Strep tagII Benzonase核酸酶
(科研级)
25KU 300 Strep标签Benzonase核酸酶说明书
100KU 1000
5000KU(工业级) 30,000
C2004 无内毒素Strep tagII Benzonase核酸酶 25KU 600 无内毒素Strep标签Benzonase核酸酶说明书
100KU 2000
5000KU(工业级) 60,000
C2005 Benzonase核酸酶残留检测试剂盒 50T 3200 Benzonase核酸酶残留检测试剂盒说明书
C0402 Strep-Tactin XT Resin 5ml 1500 Strep-Tactin XT Resin说明书
Benzonase核酸酶,是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留和内毒素污染,核酸酶活性达1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时, 也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间,增加了蛋白产量,离心时时沉淀和上清分离的更彻底,更便于溶液的离心(尤其是超滤);提高色谱纯化的效率等。
本公司Benzonase核酸酶包括四种,分别为不含任何标签的Benzonase核酸酶(科研级别)、无内毒素Benzonase核酸酶Strep tagII Benzonase核酸酶(科研级别)和无内毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶,可适应不同下游用途的需求。其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通过Strep Tactin XT Resin高效去除,而无内毒素的两种Benzonase核酸酶,内毒素含量<40EU/mL(按照单位换算量计算为,每1000U中含有的内毒素<0.15EU),可适用于药用级别的研发和生产。另外,核酸酶残留可通过我公司开发的基于 荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒进行评测,15min即可完成检测,最低可检测到2ng/ml的核酸酶残留。

用量推荐

实验类型电泳蛋白样品制备非药物蛋白生产药物蛋白生产 疫苗、病毒生产细胞药物
推荐产品Benzonase(科研级)Benzonase(科研级)
Strep-tagII Benzonase(科研级)
Benzonase(无内毒素级)
Strep-tagII Benzonase(无内毒素级)
细胞数量1X106个细胞(10mg组织)1g湿重 (重悬液10mL)1L 发酵上清液1L 培养物
最低用量125U (0.5 µL)25U/mL(1 µL)25U/mL(1 µL)0.1U/mL(0.4 µL)0.1U/mL(0.4 µL)
推荐用量500U (2 µL)250U/mL(10 µL)250U/mL(10 µL)25U/mL(100 µL)5U/mL(20 µL)
作用时间通常作用时间37℃在15~60min;25℃在30~120min;

单位定义

37℃,pH 8.0反应条件下,在30分钟内使△A260 值降低1.0(相当于完全消化37 μg DNA )的酶量定义为一个活性单位。
注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。

应用

  • 蛋白提取时去除核酸污染:在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时,Benzonase核酸酶可有效降低样品粘度,利于下游操作
  • 与细胞或细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白质产量
  • 减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象
  • 降解核酸,利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备
  • 有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率
  • 疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除
  • 储存

    置于-20°C,可保存2年。

    实例分析

    benzonase核酸酶消化DNA benzonase核酸酶增加2D电泳的分辨率
    Fig1. 分别取不同量(0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U)的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min,进行琼脂糖电泳。 Fig2. A为未加Benzonase处理的,B为加Benzonase处理的
    样品进行二维电泳。如图所示,Benzonase处理的样品可显
    著增加二维电泳的分辨率。
                 Benzonase核酸酶降解基因组DNA Benzonase核酸酶降解基因组DNA
    Fig3.经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品,
    大量基因组DNA释放出来,呈鼻涕状。
    Fig4.离心后,左管为未加Bezonase核酸酶,有鼻涕状
    粘稠物质悬浮在管中,右管为加Bezonase核酸酶,上
    清为透明液体。

    超强兼容性

    全能核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。 浓度<0.4%的Triton® X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%-1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
    条件参数 最适条件 可作用条件范围
    Mg2+ 1-2mM 1-10mM
    pH 8.0–9.2 6–10
    温度 37°C 0–42°C
    DTT 0–100mM >100mM
    β-Mercaptoethanol 0–100mM >100mM
    一价阳离子浓度(如Na+,K+) 0–20mM 0–150mM
    PO43- 0–10 mM 0–100mM

    Benzonase的去除

    对于Strep-tag II标签的Benzonase核酸酶(C2003,C2004)可通过Strep Tactin XT Resin(HaiGene,C0402)直接 去除,去除率>95%;对于不带标签的Benzonase核酸酶(C2001,C2002),可通过色谱纯化去除核酸酶,然后可通过检测残留活性(HaiGene, C2005)或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质,具体的Benzonase去除条件如下表:
    阴离子交换介质 pH 样品和平衡缓冲液 Benzonase核酸酶
    TMAE 7.0 50mM Tris/200mM NaCl not bound
    TMAE 7.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    TMAE 8.0 50mM Tris/250mM NaCl not bound
    TMAE 8.0 >50mM Tris/100mM NaCl not bound
    TMAE 9.0 >50mM Tris/200mM NaCl not bound
    TMAE 9.0 50mM Tris/100mM NaCl not bound
    DEAE 7.0 50mM Tris/200mM NaCl not bound
    DEAE 7.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    DEAE 8.0 50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DEAE 8.0 >50mM Tris/100mM NaCl not bound
    DEAE 9.0 >50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DEAE 9.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    DMAE 8.0 >50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DMAE 8.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    阳离子交换介质 pH 样品和平衡缓冲液 Benzonase核酸酶
    SO3- 6.0 20mM phosphate/100mM NaCl bound
    SO3- 6.0 20mM phosphate/200mM NaCl not bound
    SO3- 5.0 20mM acetate/200mM NaCl bound
    SO3- 5.0 >20mM acetate/700mM NaCl not bound
    SO3- 4.0 >20mM acetate/300mM NaCl bound
    SO3- 4.0 20mM acetate/800mM NaCl not bound
    C00- 6.0 20mM phosphate/0mM NaCl not bound
    C00- 5.0 20mM acetate/40mM NaCl bound
    C00- 5.0 20mM acetate/100mM NaCl not bound
    C00- 4.0 >20mM acetate/150mM NaCl partially bound
    C00- 4.0 20mM acetate/400mM NaCl not bound

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