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Exonuclease III

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C5026 Exonuclease III 2500U 200 exonuclease iii说明书
25KU 1,500
核酸外切酶 III来源于E.coli,具有3´-5´外切酶活性,它作用于双链 DNA,从 3´ OH 末端方向逐步切去单核苷酸;每次酶与底物结合催化,只有几个核苷酸被除掉,从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。该酶的最佳底物为平末端、5´突出末端双链DNA分子,但也可作用于双链DNA的缺刻处,从3´降解DNA分子,释放5´单核苷酸。对于3´突出末端,尤其是多于4nt的几乎完全不切割, 亦不能切割硫代磷酰脂键。核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构,并根据序列的不同而有差异(C>A=T>G)。另外,核酸外切酶 III还具有脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性、RnaseH活性和3´磷酸酶活性。

组分

名称 数量
Exonuclease III (100 U/μl) 25 μl/250 μl
10X Exonuclease III Buffer 1 ml

应用

  • 非定向巢式缺失
  • 定点突变
  • 链特异性探针的制备
  • 制备用于双脱氧测序的单链底模板
  • 单位定义

    50 μl 反应体系中,37℃ 条件下,30 分钟 催化E.coli DNA 产生 1 nmol 酸可溶性产物所需要的 量定义为一个活性单位。

    1X Exonuclease III Buffer

    10 mM Bis-Tris(pH 7.0),10 mM MgCl2,1 mM DTT。

    酶储存液

    50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

    热失活

    70°C 20min。

    储存

    置于-20°C,可保存3年。

    实例

    exonuclease III exonuclease III
    Fig 1:分别用不同的内切酶切质粒DNA产生5'突出末端、平末端和3'突出末端产物,然后用Exonuclease III(2.5U)分别酶切这三种产物(5 μg),将酶切产物琼脂糖电泳。泳道1:5'突出末端产物;泳道2:平末端产物;泳道3:3'突出末端产物;M:DNA Marker 10000。   Fig 2:EcoR V酶切pUC57质粒获得酶切产物,然后分别用不同量的Exonuclease III酶切该产物获得渐进缺失产物。泳道1:对照(不加Exonuclease III); 泳道2:0.312U Exonuclease III; 泳道3:0.625U Exonuclease III; 泳道4:1.25U Exonuclease III; 泳道5:2.5UExonuclease III; M:DNA Marker 10000。