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Strep-Tactin XT(Strep-Tactin的升级产品)琼脂糖凝胶FF 是一种将Strep-Tactin XT共价交联在琼脂糖凝胶微球上,形成的生物亲和层析分离介质。该纯化介质主要用于纯化Strep tag II 或Twin strep tag标签蛋白。Strep tag II 标签为8 个氨基酸的小标签(WSHPQFEK),由于标签小,仅为1kDa 左右,一般不影响融合后蛋白质的结构和功能,常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。
由于Strep-Tacin XT对Strep tag II 标签具有高度特异性,一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。Strep tag II 标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱,该洗脱方式比较温和,对蛋白影响极小。 由于Strep-Tactin对Strep tag II标签具有很强的吸附能力,在生物素的洗脱过程中不易完全洗脱,造成洗脱效率较低。可以通过在脱硫生物素洗脱液中添加25mM NaOH来提高蛋白回收效率,而添加NaOH后会造成Strep-Tactin从填料上脱落,进而污染纯化蛋白。本产品为升级的Strep-Tactin XT,其可耐受高浓度的NaOH洗脱(0.5M),除此外Strep-Tactin XT可耐受1%SDS、6M尿素,因此使用该填料可以在变性条件下纯化标签蛋白。 |
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组分
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50%的悬浮液(20%乙醇)。 |
优势
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Strep-Tactin Resin缺点 |
Strep-Tactin XT Resin优点 |
(1)常规3mM D-biotin洗脱,洗脱效率较低。 |
(1) 可采用多种洗脱模式;高效的洗脱率,灵活的洗脱条件。 |
(2)填料再生成本高,需要HABA再生,再生时间长,再生后填料结合能力下降较多,一般难以再生3次以上。 |
(2)方便的填料再生方式,通常可重复使用10次以上。 |
(3)不能在变性条件下纯化蛋白。 |
(3)可以在变性条件下纯化蛋白。 |
(4)洗脱蛋白中会有残留脱落的Strep-Tactin蛋白 |
(4)洗脱产物中不含有脱落蛋白,获得最高纯度的蛋白制品。 |
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主要技术指标
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基质 4%琼脂糖凝胶微球 |
PH耐受性 2~13 |
配基 Strep-Tactin XT |
耐盐性 <2M NaCl |
配基密度 >5 mg/ml |
SDS耐受性 <2% |
粒径 45~165 µM |
(还原剂耐受性 <10mM DTT,<0.1% beta-ME |
结合蛋白量 ≥6 mg/ml |
变性剂耐受性 <6M尿素 |
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储存
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4°C保存,切勿冻存。 |