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| 热启动Bst4.0/4.2系列试剂是HaiGene精心研制的高性能的LAMP扩增用试剂，通用于DNA或RNA的靶标检测。在快速、高耐受性的基础上，不仅实现稳定、快速、高灵敏度的扩增性能，在HotStart性能的加持下，还实现了假阳性的大幅下降。专属的冻干配方，赋予了该试剂的多用途性，不仅能满足常规的科研需求，还使得冻干产品开发和生产在一种试剂下同步完成。 制品性能特点： （1） LyoMix与冻干球全系包含热启动Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>90%,在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增。 （2） Bst4.2系列反应温度提升到70℃，大幅降低引物Dimer的形成，提高扩增特异性，并使得粗样品核酸释放更加充分。 （3） Bst4.2系列包含Helicaser，因此，允许在不使用F3/B3引物的情况下进行eLAMP扩增（easy LAMP），并允许FIP/BIP的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增均一性大幅提升。 （4） 预冻干液体形式的试剂，赋予多用途性，不仅能满足常规的科研需求，还使得冻干产品开发和生产在一种试剂下同步完成。 Bst4.0与4.2 LyoMix试剂，两者的性能有何区别？如何选择？ 首先两者都具有快速扩增的能力，但多数情况下，在相同引物的情况下4.2的扩增速度明显高于4.0，且由于反应温度高（70℃），扩增特异性更好、灵敏度更高、引物用量少。因此，新立项的项目中，首先推荐采用4.2系统进行测试和优化，如果检测性能无法达到要求，再改用4.0扩增系统测试。未确定的原因，有些引物组特别适合65℃条件下扩增，且这种适应性跟引物Tm，GC含量没有显著的关联。目前，由于70℃条件下的LAMP扩增技术为HaiGene特有，其它供应商的LAMP试剂，多数集中还在60-65℃条件下的反应。那么，在此条件下，筛选完毕的引物组，可直接使用4.0 LyoMix无缝替代。 |
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性能展示 |
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| 1、Bst 4.2 HotStart功能展示 采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性。 |
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| 2、以Bst 4.2 SYBR Green试剂进行标准LAMP和eLAMP扩增比较 以human Total RNA为模板，采用RnaseP LAMP Primer进行标准LAMP和eLAMP 扩增。在25ul扩增体系中加入10ng、1ng和0ng的RNA，70℃反应40min。从扩增结果可获得，在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除，对扩增速度几乎无影响，并且非特异性扩增得到改善。 6 Primer LAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM。 4 Primer eLAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM。 |
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| 3、以Bst 4.2 Basic试剂进行DP-eLAMP探针法扩增 在众多的探针法LAMP测试中，DP-LAMP探针法(Displaceable Probe LAMP)为HaiGene推荐的使用方法（参考PMID: 33626039）。在LAMP扩增中将LF或LB引物退火至互补的猝灭oligo，利用链置换活性获得游离的荧光信号（可参考HaiGene A3831-21说明书资料）。该方案可进一步降低LAMP的非特异扩增。下图为DP-eLAMP进行三种荧光标记探针的实验数据。结果显示HotStart Bst4.2总能获得高特异性和高重复性的扩增。 |
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| 4、以Bst4.2 L-HNB 试剂进行L-HNB (紫罗兰-淡绿) 变色反应（肉眼观察） 以2019-nCoV体外转录RNA为模板，采用eLAMP扩增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 对10000、1000、100、25copies/管的阳性RNA进行检测，ddH20为阴性对照（4重复）。下图为70℃反应30min 后的检测结果。结果表明L-HNB法获得清晰易于区分的颜色变化，极易区分阳性和阴性扩增。 |
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| 5、 以Bst4.2 L-HNB (紫罗兰-淡绿) 变色反应对反应缓冲盐Tris的耐受性测试 以2019-nCoV体外转录RNA为模板，采用eLAMP扩增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 对1000copies/管的阳性RNA进行检测（2重复），ddH20为阴性对照（2重复）。下图为70℃反应30min 后的检测结果。结果表明L-HNB法，在1x浓度下可耐受10mM Tris-HCl的缓冲盐，阳性样本仍然可以充分的变色。该变色方法不受样本中缓冲盐影响。 |
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| 6、 以Bst 4.2 Basic试剂搭配 OG 橙绿变色反应管（A3828-21） 以2019-nCoV体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为70℃反应30min后。 |
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