核酸内切酶
Rnase Free DNase I
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| Rnase Free DNase I是将单链或双链 DNA 同等程度的随机分解，生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。由于RNase-free DNase I中Protease已几乎被完全去除，从而提高了该酶在 pH 中性区域的稳定性。此外Rnase Free DNase I中添加了Rnase Inhibitor，用于抑制RNA样品中残留的RNase核酸酶，因此可以有效抑制RNA提取过程中Rnase酶对RNA的降解。Stop Buffer终止反应后，可通过一步加热失活DNase I活性。 | |||||||||||||
单位定义 |
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| 以小牛胸腺 DNA 为底物，在 25℃、pH5.0 的条件下，1 分钟内使反应液的 260 nm 吸光度增加 0.001 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（Kunitz Unit）。 | |||||||||||||
组分 |
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*Rnase Free DNase I (10 U/μl)中含有20U/μl的Rnase Inhibitor，故进行消化试验时不需要再额外添加Rnase Inhibitor。 |
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纯度 |
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| 10 U的本酶和1μg的16S, 23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化 | |||||||||||||
储存 |
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| 置于-20°C，可保存3年。 | |||||||||||||
使用注意事项 |
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1）通常加热方法即可失活DNase I。如需要去除残留的变性蛋白，可在37°C消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀RNA样品（不进行加热操作）。 2）10× RD Stop Buffer中含有螯合剂用于去除二价阳离子，进行加热失活前，必须加入5 μl 10× RD Stop Buffer并混合均匀，再进行热失活，否则会导致RNA降解。 3）处理完毕的RNA样品进行一步反转录反应时，添加量需要<20%（如20μl的反转录体系中加入量要<4μl） |
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