磷酸酶/磷酸激酶
热稳定无机焦磷酸酶
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| 热稳定无机焦磷酸酶纯化自重组 E. coli 菌株，携带从极度耐热的 Thermococus litoralis 中克隆的无机焦磷酸酶基因。该焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。 P207–4 + H20 →2HP04–2。该酶在100℃加热4h仍然具有100%活性，因此可用于PCR反应，解除生成的无机焦磷酸盐对PCR的抑制，增强DNA的复制。 | ||||||||||||||||
组分 |
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活性定义 |
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| 1单位指标准反应条件下：0.5ml反应体系，50mM Tricine pH8.5，1mM MgCl2和0.32mM PPi，75℃反应10 钟，每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐的酶量。 | ||||||||||||||||
储存 |
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| -20℃可保存3年。 | ||||||||||||||||
使用注意事项 |
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（1） 该酶在多种反应Buffer中均具有活性，通常该酶在tHDA扩增、PCR、测序反应等实验中，可直接接入即可。 （2） 该酶的用量在不同的实验中需要优化，通常在5~50U/ml浓度调整。 （3） 该酶不可以热失活。 |
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实例 |
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 Fig:以Bst2.0扩增的LAMP产物作为底物，分别应用不同量的热稳定无机焦磷酸酶在65℃作用1h，肉眼观察管内变化。管1为不加Bst 2.0 DNA 聚合酶的LAMP产物，管2为Bst 2.0 DNA聚合酶的LAMP扩增产物，管3-7为在管2产物中分别加入不同量热稳定无机焦磷酸65℃作用1h的产物。其中管3-7加入的焦磷酸酶的量分别为：0.1μl、0.25μl、0.5μl、0.75μl和1μl。 |
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