克隆载体及试剂盒
pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体（含感受态）
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| pUC57 Simple通用克隆载体采用了TOPO酶连接技术，载体预先偶联上TOPO酶，当加入PCR扩增产物后，5 min就可以完成连接反应，连接阳性率高。pUC57 Simple通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点，便于后续亚克隆。该产品适用于Taq酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的PCR产物的连接，载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。 | ||||||||||||||||||
优势 |
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组分 |
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储存 |
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| RTS DH5α冻干感受态在未溶解状态下，可于-20℃长期保存（>2年），已经溶解后，请-60℃以下保存（3个月）。 | ||||||||||||||||||
图谱 |
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测序引物 |
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正向测序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’； 反向测序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’； |
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实例 |
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| 1.应用pUC57 Simple TA平端通用克隆载体分别连接长度为2008bp的平端产物和A尾产物，挑20个菌进行菌检，阳性率分别为95%和85%。 | ||||||||||||||||||
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2.不同的载体与片段的摩尔比对连接效率的影响 片段长2432bp，使用载体与片段摩尔比分别为1:1；1:2；1:3；1:4；1:5；1:6；1:7；1:8；1:9；1：10 室温连接5min后转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检阳性片段长度为菌检阳性片段大小为2572bp。结果表明载体与片段摩尔比1:1；1:2；1:3；1:4；1:6；1:9时均有较高的阳性率，而1:5；1:7；1:8；1：10则阳性率稍低，说明连接反应时应选择正确的载体与连接片段摩尔比，推荐最佳摩尔比为1:3。 |
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3.不同连接时间对连接效率的影响 平端产物片段长2432bp，载体与片段摩尔比分别为1:3，分别室温连接5min、10min、15min、20min、25min、30min后转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检阳性片段长度为菌检阳性片段大小为2572bp。结果表明不同的连接时间对于菌斑数和阳性率的影响较小，无明显差别，建议当连接片段<2500bp时，可选择室温连接5min。 |
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4.不同长度的平端产物片段对连接效率的影响 平端产物片段长度分别为500bp、1kb、2kb和5kb，载体与片段摩尔比分别为1:3，前三个片段室温连接5min，5kb片段室温连接30min，转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检。结果表明长片段连接后菌斑数较短片段减少，但阳性率无明显差别。 |
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5.不同长度的A尾产物片段对连接效率的影响 A尾产物片段长度分别为500bp、1kb、2kb、2.5kb和5kb，载体与片段摩尔比分别为1:3，前四个片段室温连接5min，5kb片段室温连接30min，转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检。结果表明片段长度在500bp~2.5kb之间时阳性率无明显差别，当片段长度≥5kb时阳性率有所降低，此时应适当增加菌检数量。 |
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