TaqMan定量PCR试剂
5xDualStart 3GmTTx DNA/RNA qPCR Mix(可冻干)
————Aptamer超级耐热逆转录酶：应用于粗样本直扩qPCR，改变分子诊断的形式与格局PCR
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3GmTTx DNA/RNA qPCR Mix中包含HaiGene改造的极度耐热逆转录酶(Extreme ThermoStable Reverse Transcriptase, ET RTase)，该酶耐受95℃高温，可高效的逆转录500nt的RNA。因此，其不再局限于37~50℃条件下的逆转录，可以采用任意温度条件下对RNA进行cDNA逆转录（仅取决于引物的退火温度）。除此外，在同一管中，粗样本直接加热裂解-释放核酸、逆转录、PCR扩增变为成为可能，这将变革现有分子诊断试剂形式和仪器设备。ET RTase改造自耐热DNA聚合酶，经电子重构架技术，修改了酶的活性配体中心，使其不再依赖Mn2+，仅需要Mg2+即具有极强的逆转录活性，这消除了Mn2+对PCR的抑制。 在试剂形式上，HaiGene提供两种形式的3GmTTx Mix，Chemi版本和DualStart版本，Chemi版本使用起来更为灵活，而DualStart版本操作要求稍高，但扩增更严谨。两者均不含甘油，不仅可用于科学研究，在配合HaiGene研制的Q10球型冻干赋形剂后，可轻松制备含扩增引物的冻干球。这种组合设计便于研究、开发、生产流程于一体化操作，并兼具一定的灵活性，减少了试剂开发和固定化生产的难度。 |
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功能测试 |
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| （该实验结果来自HaiGene实验室，未经允许，不得转载） | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1.使用5xChemi 3GmTTx DNA/RNA qPCR Mix以人RNA total RNA（100 ng – 0.1 pg，10 倍梯度稀释）对Actin 基因进行qPCR 检测，分别进行95℃ 2min组和不加热组进行比较，每个浓度的样品做 3 个复孔。在两组 qPCR检测中，基因靶标都可有效扩增，Ct数无明显差异，说明ET Reverase Transcriptase（极度耐热反转录酶） 在95℃加热 2min后保留全部活性。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 2.使用5xChemi 3GmTTx DNA/RNA qPCR Mix以人total RNA（10 ng – 0.1 pg）和MS2 RNA（0.1 ng – 0.1fg）进行单重（左）和双重（右）qPCR 检测。在双重 qPCR和单重 qPCR检测中，两个基因靶标都可有效扩增，Ct数无明显差异。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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