其他DNA/RNA聚合酶
Bsu DNA 聚合酶
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Bsu DNA聚合酶是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶，主要应用于RPA重组酶扩增。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列；一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应，Bsu DNA聚合酶启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。 本Bsu DNA 聚合酶来源于 嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus subtilis），系将Bacillus subtilis DNA 聚合酶（Bsu） I 基因的前296个AA截去而得。该酶保留了Bsu I 的 5´-3´ 聚合酶活性，但是缺失了 5´-3´ 核酸外切酶结构域，该大片段自身缺失 3´-5´ 核酸外切酶活性，可用于重组酶扩增。 |
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应用 |
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活性定义 |
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| 在37℃条件下，30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。 | ||||||||||||||
性能测试 |
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按照如下体系配制反应： Plasmid DNA 100 ng 10×Bsu Reaction Buffer 5 μl Random9 (100μM) 2 μl dNTP mixture(10 mM) 2 μl Rnase free H2O upto 50 μl 混匀后95℃ 5min，然后冰上放置5min，分别加入不同剂量Bsu DNA聚合酶（泳道1-2：0， 泳道3-4：0.5 μl， 泳道5-6：1 μl，泳道7-8：2 μl，泳道9-10：4 μl，），分别在25℃和37℃孵育3h，电泳检测各组产物如下图 |
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1X Bsu Reaction Buffer |
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| 50 mM NaCl ，10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT | ||||||||||||||
储存 |
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| -20℃可保存2年，避免反复冻融。 | ||||||||||||||
热失活 |
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| 75°C，20min。 | ||||||||||||||
注意事项 |
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1、由于缺乏3 ´-5 ´核酸外切酶活性，Bsu DNA 聚合酶不能切除 3´未配对的突出末端，因而不适用于生成平齐末端。 2、25℃ 时 Bsu DNA 聚合酶 保留 50% 的活性，是同温度下 Klenow 片段（3´-5´ exo-）的两倍。 |
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