其它辅助原料
UNG (Uracil N-Glycosylase)
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| 尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 为来源于E. coli uracil N-glycosylase基因的重组表达蛋白，分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，但对RNA无活性。 UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染，作用原理基为：如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成了含dU碱基的PCR扩增产物，该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键，降解该PCR扩增产物。 | ||||||||||||||||||||
组分 |
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应用 |
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活性定义 |
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| 在标准PCR反应体系下，37℃条件下，1小时降解1µg含dU碱基的单链DNA的酶量为一个活性单位。 | ||||||||||||||||||||
活性测试 |
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 取1μg dUTP PCR产物，用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。 Lane 1：对照（不加UNG酶）；Lane 2-7：分别为 2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37度消化30min后的PCR产物；M：D2000 DNA Marker。 |
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性能测试 |
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 UNG在标准PCR体系下（50ul体系）性能测试。 处理方法为：在反应体系中分别加入不同量的UNG（如图所示），50度2min，95度5min，然后进入PCR循环扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。Lane 1-3：标准dNTP Mixture，UNG用量0.25U/0.5U/1U; Lane 4-6：dNTP/dUTP Mixture，UNG用量0.25U/0.5U/1U；M：D10000 DNA Marker。 |
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反应buffer |
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| Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。 | ||||||||||||||||||||
酶保存液 |
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| 20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。 | ||||||||||||||||||||
储存 |
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| -20℃可保存2年，避免反复冻融。 | ||||||||||||||||||||
热失活 |
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| 95℃，5min。 | ||||||||||||||||||||
 取1μg dUTP PCR产物进行UNG热失活测试。 Lane 1：对照（不加UNG酶）；Lane 2: 1U UNG酶37度消化30min；Lane 3： 1U UNG酶95度加热5min后，再加入PCR产物消化(37度消化30min)； Lane 4： 1U UNG酶95度加热10min后，再加入PCR产物消化(37度消化30min)；M: D2000 DNA Marker。 |
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