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pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C1801M(停售) pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒 1 kit 4000
C1801H pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒 1 kit 4800
本试剂盒所包含的原核表达载体(pCold-SUMO-10His)是在pCold-SUMO载体基础上改造而成(HaiGene专利),该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌,在低温下(15度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢,使得蛋白合成速度减慢,从而最大限度的提高了蛋白正确折叠的几率,提高了蛋白可溶性表达,增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的SUMO tag可以极大地提高小分子量蛋白的表达量,而且能进一步提高蛋白的可溶表达几率。另外,TEE信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。
升级后的pCold-SUMO-10His载体,其SUMO蛋白标签含有10个组氨酸标签(10His tag),使其结合Ni-NTA的能力更强。与较早版本的pCold-SUMO表达系统相比,pCold-SUMO-10His表达系统在保留了原有系统的蛋白可溶性生产能力、高特异性剪切能力的情况下,显著提高了与Ni-NTA的结合能力。通过与Ni-NTA结合能力的提高,在以下三个方面改善了生产重组蛋白的性能:(1)提高了粗蛋白样品中目标蛋白的捕获能力,从而提高纯化产量;(2)在蛋白纯化过程中可以使用更高浓度的咪唑进行漂洗,去杂蛋白的能力明显提升,从而获得更高纯度的重组蛋白;(3)在重组蛋白酶切去除SUMO标签后,利用Ni-NTA去除SUMO标签更为彻底,获得纯度更高的无标签目标蛋白。
pcold-sumo 载体图谱

组分

组分名称 数量 保存
pCold-SUMO-10His Vector (200 ng/μl) 50 μl -20℃
pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid (20 ng/μl) 20 μl
SUMO Protease (10 U/μl) 100 μl
10×SUMO Buffer 1 ml
rTEV Protease (10 U/μl) 100 μl
20×rTEV Buffer 1ml
1700X氯霉素(34mg/ml) 1 ml
200X L-阿拉伯糖(100mg/ml) 1 ml
1000X四环素(2mg/ml) 1 ml
E.coli Transfer Reagent 1.2 ml
Lyophilized Arctic (DE3) competent cells 5支
Lyophilized BL21(DE3)Chaprone competent cells 5支

主要特征

  • 冷启动子,低温诱导表达,最大限度地提高蛋白地可溶性
  • 分子伴侣可协助蛋白的正确折叠
  • 可大大的提高蛋白表达量
  • 两种宿主菌和两种蛋白酶可选,使实验方案更加灵活
  • 应用

    包涵体蛋白的最佳解决方法,提高蛋白的可溶性优化表达。

    实例

    pcold-sumo载体提高蛋白的可溶性表达 Fig1 . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未诱导
    2. pET15b系统表达全菌体蛋白
    3.pET15b系统表达上清液(可溶蛋白部分)
    4.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)全菌体蛋白
    5.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分)
    6.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone全菌体蛋白
    7.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分)
    8.使用Ni-NTA Resin纯化SUMO融合蛋白
    9.切除SUMO tag后的目的蛋白
    泳道2和3表明使用pET系统表达几乎无可溶性蛋白表达,皆为包涵体;泳道4和5表明使用pCold-SUMO系统于BL21(DE3)菌中,可溶性蛋白表达约占40%;泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可进一步提高蛋白的可溶性表达。
    pcold-sumo对照蛋白SUMO酶切 Fig2. 分别用2 μl和5 μl的SUMO蛋白酶(C0801)对100 μg pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid 表达所得对照蛋白进行酶切1h或3h,如图所示。M:Protein Marker,泳道1:纯化后的含SUMO标签的对照蛋白; 泳道2:2μl SUMO Protease 酶切1h产物;泳道3:5μl SUMO Protease 酶切1h产物; 泳道4:2μl SUMO Protease 酶切3h产物;泳道5:5μl SUMO Protease 酶切3h产物。