核酸内切酶
Benzonase核酸酶
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Benzonase核酸酶，是一种核酸内切酶，可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（双链，单链，线状，环状）的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性，又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度，去除蛋白样品中核酸的污染，且无蛋白酶活性残留，核酸酶活性达1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时， 也具有多种其他用途，如：减少了样品处理时间，增加了蛋白产量，离心时时沉淀和上清分离的更彻底，更便于溶液的离心（尤其是超滤）；提高色谱纯化的效率等。 本公司Benzonase核酸酶包括四种，分别为不含任何标签的Benzonase核酸酶（科研级别）、无内毒素Benzonase核酸酶、Strep tagII Benzonase核酸酶（科研级别）和无内毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶，可适应不同下游用途的需求。其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通过Strep Tactin XT Resin高效去除，而无内毒素的两种Benzonase核酸酶，内毒素含量<40EU/mL（按照单位换算量计算为，每1000U中含有的内毒素<0.15EU），可适用于药用级别的研发和生产。另外，核酸酶残留可通过我公司开发的基于 荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒进行评测，15min即可完成检测，最低可检测到2ng/ml的核酸酶残留。
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用量推荐 |
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单位定义 |
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37℃，pH 8.0反应条件下，在30分钟内使△A260 值降低1.0(相当于完全消化37 μg DNA )的酶量定义为一个活性单位。 注意：含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品，对该酶活性有部分抑制作用，使用时需要增加酶的用量。 |
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应用 |
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储存 |
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| 置于-20°C，可保存2年。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
实例分析 |
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| Fig1. 分别取不同量（0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U）的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min，进行琼脂糖电泳。 |
Fig2. A为未加Benzonase处理的，B为加Benzonase处理的 样品进行二维电泳。如图所示，Benzonase处理的样品可显 著增加二维电泳的分辨率。 |
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Fig3.经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品， 大量基因组DNA释放出来，呈鼻涕状。 |
Fig4.离心后，左管为未加Bezonase核酸酶，有鼻涕状 粘稠物质悬浮在管中，右管为加Bezonase核酸酶，上 清为透明液体。 |
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超强兼容性 |
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| 全能核酸酶在非常广泛的条件下，都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性，这使其能够与多种细胞裂解液，如RIPA，或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如：>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性，1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性，5mM的EDTA会使活性丧失90%，1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。 浓度<0.4%的Triton® X-100对核酸酶活性几乎无影响，<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性，超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低，1%的浓度会使活性丧失70%；0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响，而SDS浓度在0.1%-1%之间时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外，核酸酶可耐受6M尿素，当尿素达到7M时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Benzonase的去除 |
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| 对于Strep-tag II标签的Benzonase核酸酶（C2003，C2004）可通过Strep Tactin XT Resin（HaiGene，C0402）直接 去除，去除率>95%；对于不带标签的Benzonase核酸酶（C2001，C2002），可通过色谱纯化去除核酸酶，然后可通过检测残留活性（HaiGene, C2005）或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质，具体的Benzonase去除条件如下表： | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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