PCR DNA聚合酶类
SD DNA聚合酶
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
|
SD DNA聚合酶是一种新型DNA聚合酶，该酶具有类似Bst聚合酶的强烈的链置换活性和类似Taq DNA聚合酶的耐热性。SD DNA 聚合酶可耐受90℃高温（短暂耐受92℃），且具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'链置换活性，无外切酶活性，扩增速度1kb/min，最佳反应温度为70℃，这些特征使得该酶广泛适用于热变性PCDR (Polymerase Chain Displacement Reaction)、LAMP反应、长片段扩增、富含GC片段扩增，还可用于全基因组测序（WGA）、单细胞测序和NGS建库等领域。SD DNA聚合酶在搭配Taq DNA聚合酶的组合下可进行TaqMan探针的切割，用于qPCDR的扩增。这种qPCDR 的新型方案将槽式PCR的高灵敏特性放置于单管、一步扩增完成，这种检测策略比qPCR灵敏度高10-100 倍，并且用时更短。 HaiGene自主研发的SD2.0 DNA聚合酶是在SD酶的基础上筛选改造而成，主要优势是提高了其耐热性，可耐受95℃高温，这一性能使其对复杂样本的变性更为充分，有利于PCDR扩增时，高灵敏度的检测复杂靶标基因。由于SD2.0 Pol可完全替代原SD Pol，因此SD Pol将会逐步停产。并且，SD2.0 聚合酶提供更为丰富的版本，包括极其严谨的热启动酶Chemi-SD2.0(PCDR首选酶)和适配体封闭的严谨型热启动酶Apta-SD2.0（适用热变性的LAMP和PCDR）。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
单位定义 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1unit指在70°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 等温扩增、LAMP、热变性LAMP、tHDA和RCA、PCDR、全基因组测序、单细胞测序、NGS文库构建。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
储存 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| -20°C可保存2年。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
反应实例 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| Fig .以不同数量级的P72质粒为模板进行PCR和PCDR扩增，引物分别为Inner Primer，Out Primer，Inner+Out Primer, 产物1为Out Primer F/R(248bp)，产物2为Inner Primer F/Out Primer R(200 bp),产物3为OuT Primer F/Inner Primer R(164 bp),产物4为Inner Primer F/Inner Primer R(111 bp),1-5分别为10e5/10e4/10e3/10e2/10的P72质粒，Marker为 DNA Marker 10,000。说明：应用SD DNA 聚合酶采用四引物的PCDR的灵敏度为标准PCR 的10倍左右。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
